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如何拯救被污染的細胞


 夏天到了,細胞更容易被污染,很多養細胞的朋友在這方面困惑頗多,今天針對貼壁生長的細胞談談。 在討論之前,大家首先要有一個概念,即潔凈區,并不是沒有**,而是**的數量非常少,在我們的潔凈操作臺里,并不是真正一個**都沒有的,所以在操作的時候還是要盡量利索迅速地完成操作。盡量減少進入培養體系**的數量。 所以處理**污染的重要原則就是:無限地稀釋**的濃度,無限地減少**的數量!

對于**污染(常見為金黃色葡萄球菌和大腸桿菌);

污染處理流程

1、將污染的培養液倒掉,轉燒瓶口,加入10 mlPBS,適當晃動清洗培養瓶,然后倒掉。轉燒瓶口。

2、繼續加入10mlPBS,同樣方法晃動,清洗培養瓶,然后倒掉。

3、繼續加入5mlPBS,同樣方法洗瓶,主要是培養面,然后倒掉。

4、重復步驟3再洗。

5、重復步驟3再洗。

6、加入3-5ml雙抗,洗瓶,靜置3-5分鐘,然后吸出。

7、加入3ml雙抗,洗瓶,靜置3-5分鐘,然后吸出。

8、再加入5mlPBS洗瓶,然后吸出。

9、加入10ml培養液,加入2ml雙抗,放置培養箱培養,5小時之后,倒掉培養基,加入PBS洗瓶兩次,然后加入胰酶消化,吹打后置于離心機800-1000r/min離心,然后洗一次。置于新的培養瓶里培養,培養體系加入2ml雙抗。

10、24h之后,視情況換液,若仍然污染嚴重,培養基渾濁,重復以上步驟,若看不到污染物,則繼續步驟1)、3)、4)、6)、8),然后加入培養液培養,培養體系加入2ml雙抗。

11、24h之后,若仍污染嚴重,可再重復一次,若還污染只能棄之(不過一般沒有出現這種情況),若鏡下不見污染物,則換液PBS洗瓶,正常培養。


若為霉菌或者**污染:

     加入兩性霉素B清洗和培養,終濃度一般為2.5μg/ml(在30μg/ml時會有細胞毒性)。另外也可以選擇在培養基里加3ug/ml的制霉菌素或放線菌素D。 其它操作同;


若為支原體污染有幾種支原體**劑

     1.BM-Cyclin(就是泰妙菌素+米諾環素)2.環丙沙星,這也是一種支原體較為敏感的***,3.MRA,這個是商業化的支原體去除劑(Mycoplasma Removal Agent)是喹諾酮族***的衍生物使用后發覺,采用泰妙菌素和米諾環素的效果更好些,支原體耐藥率低,同時對細胞的抑制也較低。


除此還是需要你在無菌觀念和無菌操作上下大功夫加強了,預防為主,還是要強調無菌操作,尤其注意血清的質量,這個是主要來源。


在操作的過程中,一定要小心操作動作,輕柔緩慢,切忌大動作魯莽。防止細胞脫落。當然如果你的細胞仍有富余或者凍存的,我還是建議你把污染的扔掉,再復蘇方便省事。這個拯救細胞還是主要針對你就只剩這一瓶細胞無路可退的時候。

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